RIPA裂解液（强）

产品信息：

RIPA裂解液（RIPA Lysis Buffer）能够快速高效地裂解贴壁和悬浮培养的哺乳动物细胞，从而收集细胞中的蛋白质。大多数抗体和蛋白质抗原不受RIPA裂解液成分的影响。此外，RIPA 缓冲液可Z大限度地减少非特异性蛋白质间相互作用，从而保持低背景，同时允许大多数特异性蛋白质间相互作用发生，便于研究相关的蛋白质-蛋白质相互作用。RIPA裂解液裂解得到的蛋白样品可以用于常规的Western、IP、Co-IP等。1 mL RIPA裂解液足以裂解一个100 mm培养皿（0.5 至 5 × 10⁷ 个细胞）的贴壁哺乳动物细胞或50 mg哺乳动物组织。RIPA裂解液的配方有很多种，根据其裂解细胞的强度大致可以分为强、中、弱三类。

成分：

RIPA裂解液（强）含有 50 mM Tris-HCl，pH 8.0，150 mM氯化钠，1.0% Triton X-100，1.0% 脱氧胆酸钠，和 0.1%十二烷基硫酸钠（SDS）。

储存方式：

RIPA裂解液（强） 在4℃可保存一年。

使用RIPA裂解液所需设备和材料：

1）低温冷冻离心机

2）离心管

3）洗涤缓冲液（如杜氏磷酸盐缓冲液D-PBS）

4）贴壁细胞刮刀

5）组织破碎仪

贴壁细胞裂解步骤：

1. 吸出细胞的培养基。

2. 洗涤细胞以去除残留的培养基。缓慢加入与原培养基体积相等的洗涤溶液（如D-PBS），小心不要使细胞脱落，然后移除洗涤溶液。

3. 加入适量的RIPA裂解液（1 mL可用于0.5至5×10⁷个细胞）。在冰上或4℃条件下孵育五分钟。

4. 使用细胞刮刀快速刮培养皿以收集并裂解细胞。将细胞裂解液转移到冰上的试管中。

5. 在4°C条件下以8,000 g离心10分钟以沉淀细胞碎片。

6. 小心地将含有可溶性蛋白质的上清液转移到冰上的试管中进行免疫沉淀或其他分析。细胞裂解液可以立即使用或在液氮中快速冷冻并储存在-80°C以备将来使用。注意反复冻融细胞裂解液可能会导致一些变性蛋白质聚集。

   悬浮培养细胞裂解步骤：

1. 以450 g离心5分钟沉淀细胞。

2. 小心地吸出移除细胞沉淀中的培养基。

3. 洗涤细胞以去除残留的培养基。加入与原培养基体积相等的洗涤溶液（如D-PBS）。轻轻混合以完全重悬细胞。以450 × g离心5分钟沉淀细胞并小心地移除洗涤溶液。

4. 向细胞沉淀中加入适量的RIPA缓冲液（1 mL可用于0.5至5×10⁷个细胞），轻轻混合以完全重悬细胞。在冰上或4℃条件下孵育五分钟。

5. 在4°C条件下以8,000 g离心10分钟以沉淀细胞碎片。

6. 小心地将含有可溶性蛋白质的上清液转移到冰上的试管中进行免疫沉淀或其他分析。细胞裂解液可以立即使用或在液氮中快速冷冻并储存在-80°C以备将来使用。注意反复冻融细胞裂解液可能会导致一些变性蛋白质聚集。

   动物组织裂解步骤：

1. 称量冷冻组织样本，只需20-50 mg组织即可，记录每份组织样本的重量。

2. 向每mg组织样本加入20 μL RIPA裂解液，并保持在冰上。

   4. 加入不锈钢珠，并将组织放在冰上，使用组织破碎仪进行匀浆。

   5. 取出不锈钢珠将匀浆后的组织转移到一个新的1.5 mL离心管中，在4°C条件下以8,000 g离心10分钟以沉淀组织碎片。

   6. 小心地将含有可溶性蛋白质的上清液转移到冰上的试管中进行免疫沉淀或其他分析。组织裂解液可以立即使用或在液氮中快速冷冻并储存在-80°C以备将来使用。注意反复冻融细胞裂解液可能会导致一些变性蛋白质聚集。

   注意事项：

1. 裂解液中含有的SDS易沉淀析出，当有SDS析出时应该37℃水浴使沉淀重新溶解后恢复到室温使用。

2. 如果需要向RIPA裂解液（强）中添加蛋白酶抑制剂，可以购买cocktail蛋白酶抑制剂混合物。

3. 裂解样品的所有步骤都需在冰上或4℃进行。

4. 如果使用RIPA裂解液（强）进行Co-IP实验，没有获得预期结果，可尝试使用RIPA裂解液（中）或RIPA裂解液（弱）重复实验。

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