0.25%胰蛋白酶-EDTA,含酚红
产品信息:
本品为0.25%胰蛋白酶和0.02% EDTA溶于含酚红,不含钙镁的Hank’s平衡盐溶液。本品使用的胰蛋白酶为来自Gibco的经过辐照的猪胰蛋白酶1:250粉末,经内毒素、支原体、细菌、真菌和病毒污染检测。胰蛋白酶为丝氨酸蛋白酶,可特异性切割蛋白中赖氨酸和精氨酸的羧基端(后接脯氨酸时除外),pH 8.0和37℃为胰蛋白酶适宜的反应条件,胰蛋白酶主要用于贴壁细胞的解离。EDTA的作用则是螯合钙镁离子,从而抑制细胞间的黏附作用,增强胰蛋白酶的细胞解离效果。
储存方式:
胰蛋白酶-EDTA溶液在-20℃可保存一年,在4℃可保存一个月。
使用胰蛋白酶-EDTA溶液所需设备和材料:
无菌PBS
含血清完全培养基
无菌离心管
离心机
胰蛋白酶-EDTA溶液的使用步骤:
弃去培养容器中的培养基。
加入适量无菌PBS,足以覆盖容器底部即可。
弃去无菌PBS,以洗掉残留的培养基。
加入适量胰蛋白酶-EDTA溶液,足以覆盖容器底部即可,37℃孵育,具体孵育时间由细胞类型决定。
用移液器轻柔吹打细胞,显微镜下确认细胞完全解离。
将细胞悬液转移至无菌离心管,加入等体积含血清完全培养基中和胰酶,终止胰酶作用。
1000 rpm离心3-5分钟,弃去管内全部液体,加入新鲜的含血清完全培养基重悬细胞。
将重悬后的细胞接种到新的培养容器中继续培养。
注意事项:
胰蛋白酶孵育时间过长可能损伤细胞膜,导致细胞死亡(原代细胞尤其敏感)。对于敏感细胞的解离,建议对胰蛋白酶溶液进行稀释,并控制孵育时间。
胰蛋白酶不宜在4℃条件下长期保存,切勿反复冻融,小量使用时建议分装后保存于-20℃。
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